皺紋盤鮑HdhTPX2基因在畢赤酵母中的表達及抗氧化活性研究

喬琨; 方春華; 陳貝; 彭會; 潘南; 蔡水淋; 許旻; 陳麗嬌; 郝華; 劉智禹 福建省水產研究所/福建省海洋生物增養殖與高值化利用重點實驗室; 福建廈門361013; 福建農林大學食品科學學院; 福建福州350002; 廈門大學海洋與地球學院; 福建廈門361102

關鍵詞:皺紋盤鮑 硫氧還蛋白過氧化物酶 畢赤酵母 抗氧化 

摘要:為研究皺紋盤鮑Haliotis discus hannai Ino硫氧還蛋白過氧化物酶(TPX2)蛋白的抗氧化活性,將HdhTPX2基因克隆至pPIC9K載體,通過電擊轉化至畢赤酵母GS115菌株中,獲得重組表達質粒pPIC9K-HdhTPX2,經甲醇誘導及親和層析純化得到重組HdhTPX2蛋白,并進行質譜鑒定及體外抗氧化功能檢測。結果表明:本研究中成功構建了重組畢赤酵母菌株GS115/pPIC9K-HdhTPX2,經表達條件的優化,在pH為7的培養基中用0.5%甲醇誘導表達72 h,分泌表達上清液中得到相對分子質量約為25 000的穩定表達產物,純化后的蛋白經質譜鑒定為目的蛋白;體外活性測定發現,該蛋白清除羥自由基(·OH)能力強于維生素C,并對H2O2引起的細胞損傷具有一定的保護作用。研究表明,皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化物酶HdhTPX2在畢赤酵母表達系統中得到高效表達,重組表達產物具有抗氧化活性功能。

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