關鍵詞：單克隆抗體 細胞株 工藝開發 

摘要：以PD-1分子為靶點,以中國倉鼠卵巢(CHO)細胞為宿主,構建高表達抗PD-1單克隆抗體的細胞株,優化細胞株篩選工藝,優化工藝參數,得到穩定高表達PD-1細胞株。運用懸浮細胞CHO表達抗PD-1的抗體,首先在質粒構建中,將重鏈和輕鏈插到同一個載體上,保證了重鏈和輕鏈的比例為1∶1,實現共表達,輕重鏈在一個載體上,再同PD-1基因共轉染,對后面的基因擴增篩選提供基礎。采用懸浮培養,使用化學成分確定的培養基CD培養基,支持重組CHO細胞的生長,達到高密度培養,從而得到高表達蛋白。結果表明蛋白表達量穩定性分析表明,篩選出兩株表達量較高的細胞株,表達量分別達到2.03g/L和2.09g/L,為抗PD-1抗體的生產提供了穩定高產的細胞系。得到了穩定高表達PD-1細胞株,且蛋白質量與原研藥一致。

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