關(guān)鍵詞：前列腺癌細(xì)胞 番瀉苷a 信號通路 自噬 

摘要：目的探索番瀉苷A (Sennoside A, SA)對前列腺癌細(xì)胞LNCap的自噬性死亡的影響及其作用機(jī)制研究.方法體外培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞LNCap,采用不同濃度SA (5、 10、 20 μmol/L)處理, CCK-8法檢測細(xì)胞存活率及增殖情況, FCM法檢測細(xì)胞凋亡率,免疫熒光檢測細(xì)胞中LC3分布情況, Western印跡檢測凋亡相關(guān)蛋白、自噬蛋白以及磷酸化JAK激酶2/磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄因子3 ( JAK2/STAT3)信號傳導(dǎo)途徑相關(guān)蛋白水平;體內(nèi)通過皮下注射前列腺癌細(xì)胞LNCap建立移植瘤裸鼠模型并給予不同劑量SA [5、 10、 20 mg/(kg·d)]腹腔注射給藥,連續(xù)給藥3周,測量給藥后腫瘤質(zhì)量,免疫組化檢測增殖細(xì)胞核抗原(Ki67 antigen, Ki67)、半胱氨酸蛋白酶-3 ( Caspase-3)水平, Western印跡檢測腫瘤組織自噬相關(guān)蛋白與JAK2、 STAT3水平.結(jié)果與Ctrl組比較,隨著SA濃度增加, LNCap細(xì)胞的存活率、增殖率降低, LNCap細(xì)胞凋亡率增加, Ki67、增殖細(xì)胞核抗原( PCNA)水平降低,而Caspase-3、 Caspase-9 水平增加;免疫熒光檢測結(jié)果顯示與Ctrl組比較,隨著SA濃度增加LNCap細(xì)胞中LC3分布越多;裸鼠移植瘤體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示與Ctrl相比,隨著SA劑量增加,腫瘤質(zhì)量逐漸降低, Ki67 含量降低,而caspase-3 水平增加;體外與體內(nèi)Western印跡檢測結(jié)果顯示與Ctrl組比較,自噬基因( Beclin1)、自噬體膜蛋白微管相關(guān)蛋白1輕鏈3-Ⅱ/自噬體膜蛋白微管相關(guān)蛋白1 輕鏈3-Ⅰ( LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)水平隨著 SA濃度增加而升高,而p62、 P-JAK2、 P-STAT3及c-Myc水平隨著SA濃度增加而降低.結(jié)論 SA可以通過抑制JAK2/STAT3信號傳導(dǎo)、上調(diào)促自噬與凋亡蛋白水平,從而促進(jìn)前列腺細(xì)胞LNCap自噬死亡.

醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志要求:

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